Sprememba fosforilacije
Raziskave fosforiliranih proteinov in peptidov lahko ljudem pomagajo razjasniti mehanizem zgornjega procesa in nadalje razumeti naravo življenjskih aktivnosti. V zadnjih letih je z nenehnim razvojem proteomske tehnologije študij fosforilacije proteinov deležen vse večje pozornosti. Številni naravni toksini in patogeni imajo svoje učinke tudi tako, da spremenijo status fosforilacije znotrajceličnih beljakovin.
Fosforilirani polipeptidi se v glavnem nanašajo na Ser, Tyr in Thr. Hidroksilna skupina stranske verige ostanka je modificirana v polipeptid kislinskega fosfata. Doslej modifikacija fosforilacije polipeptidov v glavnem vključuje metodo post-fosforilacije in dve metodi sinteze:
Pri modificiranju z monomerno metodo je fosforilirano aminokislino težko kondenzirati s peptidno verigo zaradi sterične ovire, ki jo povzroča večja modifikacijska skupina stranske verige, in kasnejša uvedba aminokisline bo težja. Še posebej, če vsebuje več modifikacij mesta fosforilacije, bo sinteza postala izjemno težka, končni produkt pa ima kompleksne komponente, ga je težko ločiti in ima izjemno nizek izkoristek. Če je torej fosforiliranih več mest v peptidni verigi, lahko pride v poštev metoda post-fosforilacije. Glavni proces sinteze je selektivno odstranjevanje zaščitnih skupin stranske verige aminokislin, ki jih je treba označiti po končani sintezi polipeptida. Za Tyr, Thr Aminokisline z nezaščitenimi stranskimi verigami se lahko uporabijo neposredno za reakcijo. Zaščitna skupina stranske verige pri 1 % TFA/DCM Pod določenimi pogoji se lahko kvantitativno odstrani. Med post-fosforilacijo lahko uporabimo bis benzil fosforamidit. Tetrazol ustvari aktivni intermediat fosforamidit tetrazol, ki je povezan s hidroksilno skupino in nato oksidiran v pogojih peroksikisline, da se ustvari fosforilna skupina za dokončanje reakcije.
- Ponujamo storitve spreminjanja fosforilacije pSer, pTyr, pThr in D-pSer, D-pTyr, D-pThr.
- Fosforilacijske modifikacije 2 mest, 3 mest, 4 mest in 5 mest je mogoče izvesti hkrati.
Fosforilirani peptidi Sintetični primer (Thr(HPO3), Tyr(HPO3), Ser(HPO3) počakajte)
1. V zaporedju so 4 mesta fosforilacije (xxxpSpTxxxpSxxxpTx), čistost je 95 % in zaključni cikel je 3 tedne.
