Reagenti za peptidno kondenzacijo

Trenutno se pri sintezi peptidov za dokončanje peptidnih reakcij uporabljajo predvsem metode karboksilne aktivacije. Najzgodnejše uporabljene metode so bile aktiviranje aminokislin v kislinske kloride, azide, simetrične anhidride in mešane kislinske anhidride. Vendar pa so jih zaradi obstoja racemizacije aminokislin pod temi pogoji, nevarnosti reakcijskih reagentov in kompleksnosti priprave postopoma nadomestili kasnejši kondenzacijski reagenti, ki jih lahko glede na njihovo strukturo razdelimo na dve vrsti.: Glavni kondenzacijski reagenti so: karbodiimidni tip, tip onijeve soli (uronij).

V glavnem vključujejo: DCC, DIC, EDC.HCl počakajte. uporabite DCC izvedite reakcijo, zaradi DCU obstaja DMF Ima zelo malo topnosti in proizvaja belo oborino, zato se na splošno ne uporablja v trdni-fazni sintezi. Ker pa je poceni, ga je mogoče odstraniti s filtracijo v tekoči{4}}fazni sintezi in se še vedno pogosto uporablja. EDC.HCl Zaradi svoje topnosti v vodi se pogosto uporablja pri povezovanju polipeptidov in proteinov in je tudi zelo uspešen. Vendar pa je ena največjih pomanjkljivosti te vrste kondenzacijskega reagenta ta, da bo pri samostojni uporabi več stranskih reakcij. Vendar raziskave kažejo, da lahko takšni reagenti, če jih dodamo med postopkom aktivacije HOBt, HOAt, nadzorujejo stranske reakcije v zelo nizkem obsegu. Mehanizem reakcije je naslednji:

Slika 2 Mehanizem aktivacijske reakcije DIC

Kondenzacijski reagenti tipa onijeve soli imajo visoko reaktivnost in hitro hitrost ter se zdaj pogosto uporabljajo, predvsem vključujejo: HBTU, TBTU, HATU, PyBOP čakanje. Med uporabo tega reagenta je treba dodati organsko bazo, kot je diizopropiletilamin (DIEA), N- metilmorfolin (NMM). Aminokislina se lahko aktivira šele po dodajanju tega reagenta. Mehanizem reakcije je naslednji:

Smole, ki se uporabljajo v trdni{0}}fazni sintezi peptidov, so na splošno polistiren-divinilbenzenski materiali z velikostmi od 75 do 150 μm. Stopnja navzkrižne-povezave je med 1-2 %, večina tistih, ki se zdaj uporabljajo, pa je 1 %, ker pri tej stopnji navzkrižne-povezave smola DMF, DCM dobro nabreka lastnosti in ima tri{12}}dimenzionalno mrežno strukturo, reaktantne molekule pa se lahko prosto gibljejo znotraj smole. Najbolj kritičen del smole je povezovalna roka, ki je na enem koncu povezana s smolo, na drugem pa služi kot reakcijsko mesto. Smole, ki se trenutno pogosto uporabljajo, so: PAM, MBHA, Wang, 2-Cl-Trt, Rink-Amide-MBHA čakanje. v PAM se MBHA uporablja v strategiji BOC, ker je zelo stabilen na kislino, mora biti HF, TFMSA Rezati ga je mogoče samo v pogojih močne kisline.

Ko je sinteza peptida v trdni{0}}fazi končana, je treba izbrati ustrezen reagent za cepitev, da se peptid odcepi od smole, nato pa oboriti z ledenim etrom, zbrati oborino s centrifugiranjem in HPLC ločiti, očistiti in-sušiti z zamrzovanjem, da dobimo končni peptidni produkt.

Zaradi različnih izbranih smol in aminokislinskih zaporedij metode cepitve, izbrane med cepitvijo, niso povsem enake. Na splošno so pogoji cepitve izbrani v kislih pogojih. Za PAM, smolo MBHA, običajno uporabljeno HF rezanje, je treba med postopkom rezanja dodati p-krezol, p-merkaptofenol, anisol in druge reagente. In za Wang, Rink-Amide, Trt Resin, ki se običajno uporablja za rezanje TFA, med postopkom rezanja dodajte etilen glikol, anisol sulfid, vodo, triizopropilsilan, fenol itd.

Ti aditivni reagenti se uporabljajo predvsem kot reagenti za zajemanje karbokationa. Namen je zajeti karbokation, ki nastane med reakcijo cepitve, in zmanjšati stranske reakcije, ki jih povzroči napad teh karbokationovih ionov na nekatere stranske verige aminokislin. Aminokisline, pri katerih obstaja večja verjetnost, da bodo povzročile stranske reakcije, vključujejo: Trp, Tyr. Odmerjanje rezalnega reagenta je običajno 10-15 ml/g smole.

Običajno uporabljena rezalna razmerja: HF/p-krezol/p-tiokrezol (90/5/5), TFA/TIS/EDT/H2O (94/1/2,5/2,5), Reakcija se običajno izvaja pri sobni temperaturi 2 h-4h.

Pri sintezi peptidov v trdni{0}} fazi pogosto naletimo na problem neuspešne sinteze peptidov ali nizke učinkovitosti sinteze. Glavni razlog je v peptidnem zaporedju, ker se nekatera peptidna zaporedja tvorijo na smoli. -Zvijanje spremeni lastnosti nabrekanja smole in lahko tudi zakoplje aktivna mesta reakcije v smoli, kar oteži potek reakcije. Trenutna poročila to kažejo

Uporabite mešana topila, DMSO/DMF, 6N raztopino gvanidina/DMF

Povečajte temperaturo reakcije ali uporabite mikrovalovno metodo

Uporabite kaotropne soli, LiCl, NaClO4 počakajte.

Uporabite smolo PEG-PS z boljšimi lastnostmi nabrekanja, hkrati pa zmanjšajte obremenitev smole (0,05–0,2 mmol/g)

​